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膠原

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鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說明

【產品名稱】鼠尾膠原蛋白Ⅰ型( Rat tail tendon collagen Type Ⅰ)

【產品介紹】

本產品通過混合酶法,通過醋酸抽提、氯化鈉沉澱磷酸氫二鈉沉澱等步驟製備的,可以用於包被細胞培養器
皿,培養一些在普通細胞培養皿中不易貼壁的細胞,也可以用於製備三維膠,模擬真實的生長環境,使細胞在三
維環境中生長。

【質量保證】

本產品來源於S P F級別的S D大鼠鼠尾腱,所有飼養S D大鼠無特定病原體,原料來源安全、可靠、原料供應充足
且均一性好。本中心上級主管部門為廣東省衛生廳,產品質量可靠、有保證。

【特       色】

SPF級別的膠原蛋白來源 專業的動物飼 養環境 高純度的I型膠原蛋白 體外細胞培養的利器。

【使用方法】

1、細胞壁培養皿的表麵包被推薦濃度:1 - 5 u g / c m2

以包被濃度為2 u g / c m 為例:用無菌0 . 0 0 6 m o l / L(0 . 3 6 g / L)乙酸將膠原蛋白稀釋到0 . 0 1 2 m g / m l。按表(一)體積加到相應的培養器皿中,確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表麵,開蓋在超淨台上過夜晾幹。也可以在室溫放置1小時後,用P B S洗3 - 4次後直接使用或晾幹.包被好的器皿在4 - 2 5℃至少可保存3個月以上的時間。

 

表麵積( c m2 ,每孔或每皿)

加入0 . 0 1 2 m g / m l膠原的體積

9 6孔細胞培養板

0.3

50 

2 4孔細胞培養板

1.9

300

1 2孔細胞培養板

3.8

600

6孔細胞培養板

9.5

1580

3 5 m m細胞培養皿

8

1330

6 0 m m細胞培養皿

21

3500

1 0 0 m m細胞培養皿

55

9170

2、三維膠原的製備

鼠尾膠原蛋白I型在濃度1 m g / m l以上,p H = 7左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1 - 2 m g / m l。鼠尾膠原蛋白溶解於0 . 0 0 6 m o l / L乙酸中,在成膠過程中需要加入0 . 0 6 X體積0 . 1 m o l / L N a O H來中和。

需要的溶液(均需要無菌、預冷):

1 0 x P B S(可含1 0 m g / L的酚紅用於p H指示),或1 0 x培養液

0 . 1 m o l / L N a O H,0 . 1 m o l / L 乙酸(一般不用),雙蒸水

A . 不含細胞的三尾膠原的製備(以配製1毫升,1 m g / m l三維膠為例):將2 0 0 u l鼠尾膠原蛋白I型(5 m g / m l)加到置於冰浴的離心管中,加入6 9 0 u l H O。然後加到1 2 u l 0 . 1 m o l / L N a O H中(如果反過來把1 2 u l 0 . 1 m o l / L N a O H加到膠原溶液中,會由於N a O H不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結),立即加入1 0 0 u l 1 0 x P B S或1 0 x培養液,混勻後立即加到培養皿中(混勻後p H為7左右,如果P B S或培養液中沒有加酚紅,初次使用時需要用p H試紙測試)。將培養器皿在室溫下放置2 0分鍾待膠凝固後,轉移到培養箱內。如果配置中使用的是1 0 x P B S,使用前需要加入適當體積的細胞培養液預平衡。

B .含細胞的三維膠原的製備(以配置1毫升,1 m g / m l三維膠為例):準備好懸浮於培養液的細胞,並放置於冰浴中。將2 0 0 u l鼠尾膠原蛋白I型(5 m g / m l)加到1 2 u l 0 . 1 m o l / L N a O H中(如果反過來把1 2 u l 0 . 1 m o l / L N a O H加到膠原溶液中,會由於N a O H不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結),立即混勻。再加入2 3 u l 1 0 x P B S或1 0 x培養液,混勻(混勻後p H為7左右,如果P B S或培養液中沒有加酚紅,初次使用時需要用p H試紙測試)。加入7 6 0 u l的細胞懸浮液,混勻後立即加到培養皿中。將培養器皿在室溫下放置2 0分鍾待膠凝固後,加入適當體積的細胞培養液,轉移到培養箱中培養。

注:鼠尾膠原蛋白I型在室溫下p H中性時可迅速成膠,在操作過程中要盡量保持低溫()。

2019年9月4日 09:56
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